PROSPECÇÃO, EXPRESSÃO HETERÓLOGA E EFEITO DO DOMÍNIO CBD DE ChiA74 DE Bacillus thuringiensis SOB Spodoptera frugiperda E NA INFECÇÃO POR BACULOVÍRUS
Nome: GARDÊNIA ROSA DE LISBÔA JACOMINO
Data de publicação: 01/04/2025
Banca:
Nome |
Papel |
|---|---|
| ANDRE DA SILVA XAVIER | Presidente |
| CINTIA DOS SANTOS BENTO | Examinador Interno |
| THALITA SUELEN AVELAR MONTEIRO | Examinador Externo |
Resumo: O gene ChiA74 de Bacillus thuringiensis (Bt) codifica uma quitinase que contém um
domínio de ligação à quitina (CBD) que desempenha um papel fundamental na interação
da enzima com substratos quitinosos apresentando um potencial de aplicação para controle
biológico. O controle biológico é uma forma de diminuir o uso de agroquímicos em
lavouras, através do controle de pragas de forma sustentável e eficaz. Objetivou-se com o
presente estudo prospectar a nível molecular a diversidade do domínio CBD em isolados
de Bacillus sp. oriundos de solos e caracterizar funcionalmente o domínio CBD do gene
ChiA74 do isolado ABTS-1857 de Bacillus thuringiensis subespécie aizawai (Bta)
utilizado em produtos comerciais, avaliar sua atividade biológica, seu efeito na
mortalidade de Spodoptera frugiperda e investigar sua compatibilidade com o baculovírus
Spodoptera frugiperda nucleopolyhedrovirus (SpodovirPlus®). Para isso, foram
conduzidos ensaios de bioprospecção para isolar Bacillus thuringiensis a partir de
amostras de solo de diferentes localidades e o isolado ABTS-1857 de Bta de um produto
comercial foi inserido como controle positivo. A partir dos isolados de Bacillus sp.
coletados e do isolado ABTS-1857 de Bta, que apresentaram o domínio CBD do gene
ChiA74, os produtos de PCR correspondentes ao domínio CBD foram amplificados,
clonados, sequenciadas, e por fim analisados filogeneticamente e modelados
estruturalmente utilizando o software AlphaFold Server. A expressão heteróloga apenas
do domínio CBD do isolado ABTS-1857 de Bta foi realizada em Escherichia coli
pRARE2, e a proteína recombinante foi analisada por SDS-PAGE e espectrometria de
massas. Ensaios biológicos com S. frugiperda indicaram que o domínio CBD isolado teve
um efeito incrementando a mortalidade das lagartas em 19%. Além disso, a coaplicação
do CBD com S. frugiperda nucleopolyhedrovirus (SpodovirPlus®) não reduziu a
infectividade do baculovírus, sugerindo que ambos podem ser utilizados em conjunto sem
comprometer a eficácia do biocontrole. O presente trabalho reforça a importância do
domínio CBD na interação com quitina e seu potencial papel no metabolismo de insetos.
Além disso, a compatibilidade do CBD com o baculovírus abre novas perspectivas para a
formulação de bioinseticidas combinados, contribuindo para estratégias integradas de
manejo de pragas. Estudos adicionais são necessários para elucidar melhor o mecanismo
de ação do domínio CBD e sua aplicabilidade em controle biológico de pragas na
agricultura.
